Original:https://people.rit.edu/pac8612/webionex/website/html/ione8ho9.html

Хроматография

Эта страница также доступна на румынском и немецком языках .

Хроматография - это процесс разделения, который включает разделение белка (или любого другого растворимого аналитического вещества) между нерастворимой стационарной фазой и подвижной фазой, которая проходит по ее поверхности . Простая, но полная система хроматографии показана на диаграмме ниже.

Хроматограмма: запись разделения, производимого регистратором или интегратором, на основе сигнала, полученного от детектора.

T m : время, необходимое для перемещения подвижной фазы по всей длине колонны. Например, если ваш столбец имеет общий объем 100 мл и стационарная фаза занимает 40 мл, тогда подвижная фаза занимает 60 мл. Если подвижная фаза протекала со скоростью 5 мл/мин, то для передвижения фазы от инжектора до детектора через колонку потребовалось бы 12 мин. T m иногда можно определить, идентифицируя небольшой пик на ранней стадии хроматограммы, полученный в результате слегка другого растворителя в мобильной паузе, которая поступает из введенного образца. T m можно также определить, проверив время элюирования образца, которое вообще не удерживается неподвижной фазой. В случае катионообменной смолы для определения t m можно использовать отрицательно заряженный белок. Следует также отметить, что другие факторы, включая длину и диаметр трубки, которые соединяют инжектор и детектор с колонкой, могут влиять на значения t m .

Когда аналит любого вида подвергается хроматографии, он движется с той же скоростью, что и подвижная фаза, когда он находится в подвижной фазе, и он неподвижен, когда он связан с неподвижной фазой. Другими словами, все аналиты тратят время, эквивалентное t m в подвижной фазе. Разница в количестве времени, которое они тратят на стационарную фазу, позволяет им быть отделенными друг от друга.

T r : время удерживания или время, необходимое для элюирования белка из колонки.

T r ': отрегулированное время удержания, которое описывает количество времени, которое белок провел в неподвижном состоянии во время разделения.

K ': коэффициент мощности, можно определить с помощью приведенного ниже уравнения. K 'используется для сравнения хроматографического поведения аналита в том же столбце, когда он присоединен к двум различным системам. В этом случае значения t m могут изменяться, но значения k должны оставаться неизменными. Коэффициент емкости также указывает количество томов столбцов мобильной паузы, которое должно использоваться для элюирования аналита. Значение k '1 указывает, что необходимо использовать 2 колонки объема мобильной фазы, в то время как значение ak' 5 означает, что необходимо использовать 6 томов столбцов.

V r : объем удерживания пропорционален времени удерживания, основанному на постоянном расходе хроматографической системы. Если время удерживания составляет 5 мин, а объемный расход (u v ) составляет 5 мл / мин, тогда V r составляет 25 мл.

V m : объем мобильной фазы (также известный как объем пустот )

Относительное удерживание ( a ): отношение коэффициентов емкости (k ') или отрегулированных времен удерживания (t r ') для двух аналитов. По соглашению, a > 1.

Разрешение: степень разделения между двумя аналитами на хроматографической системе. На вышеприведенной хроматограмме соединение А и соединение В называются «исходно разрешенными», тогда как соединение В и соединение С неразрешимы. Разрешение можно рассчитать по следующему уравнению.

Где w ave - среднее значение двух пиковых значений ширины в единицах времени. Второе уравнение для разрешения полезно для его прогностической ценности при проектировании разделения:

Где N - число теоретических тарелок для разделения.

Похожие темы